L'église Saint-Florentin est construite à la demande de Louis XI, qui souhaitait que les Amboisiens cessent de fréquenter la collégiale Saint-Florentin du château. Le chantier est en cours en 1479 mais le projet ne convient pas au roi. Elle est achevée, difficilement, au début du XVIe siècle. Son clocher est ajouté au milieu du XVIe siècle. Jusqu'à la destruction de la collégiale du château en 1806, l'église porte le nom de Notre-Dame-en-Grèves. Cette dénomination s'explique par la localisation de l'église, qui donnait directement sur la grève de la Loire. Au niveau de son chevet, les traces d'arrachement du mur sont celles du rempart de la ville, sur lequel elle s'adossait. Saint-Florentin connaît une importante phase de travaux en 1876, qui a vu la transformation de la voûte en bois en une voûte en plâtre soutenue par des piliers. Les vitraux d'origine, soufflés par les bombardements de 1940, sont remplacés en 1956 par des créations du maître-verrier Max Ingrand. Il avait réalisé les vitraux de la chapelle Saint-Hubert du château d'Amboise quatre ans plus tôt. En très mauvais état, un arrêté de péril est pris en 1993 pour en interdire l'accès. Une restauration permet sa réouverture au début des années 2000. Toujours affectée au culte, l'église Saint-Florentin accueille régulièrement des manifestations artistiques et culturelles.